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BIU-87人膀胱癌細胞實驗操作步驟

點擊次數(shù):200 更新時間:2025-07-24

BIU-87人膀胱癌細胞實驗操作步驟

細胞傳代與擴增
當細胞密度達到80%-90%時,需進行傳代。棄去舊培養(yǎng)基,用預(yù)冷的PBS輕柔洗滌2次以去除殘留血清。加入1-2 mL 0.25%含EDTA),37℃消化1-2分鐘,顯微鏡下觀察細胞回縮變圓后,立即加入含血清的培養(yǎng)基終止消化。吹打制成單細胞懸液,按1:3至1:4比例分裝至新培養(yǎng)瓶,補充適量培養(yǎng)基,輕輕搖晃使細胞分布均勻,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

細胞凍存與復(fù)蘇
凍存:取對數(shù)生長期細胞,消化離心后棄上清,用預(yù)冷的凍存液(含90%血清+10%DMSO)重懸,分裝至凍存管(1-1.5 mL/管),標注細胞類型、代次及日期。程序性降溫:4℃ 30分鐘→-20℃ 2小時→-80℃過夜,最后轉(zhuǎn)入液氮長期保存。
復(fù)蘇:從液氮中迅速取出凍存管,37℃水浴震蕩至冰晶融化,酒精消毒后轉(zhuǎn)移至15 mL離心管,加5 mL培養(yǎng)基離心(1000 rpm, 5分鐘)。棄上清,用新鮮培養(yǎng)基重懸,接種至培養(yǎng)瓶,24小時后更換培養(yǎng)基以去除DMSO殘留。

實驗干預(yù)與檢測
根據(jù)研究目的,可進行藥物處理、基因轉(zhuǎn)染或siRNA干擾等操作。例如:
藥物處理:將配置好的藥液加入培養(yǎng)基,設(shè)置濃度梯度(如0 μM、5 μM、10 μM),每24小時觀察細胞形態(tài)并記錄。
CCK-8檢測:接種細胞至96孔板(3000-5000細胞/孔),干預(yù)后每孔加10 μL CCK-8試劑,孵育2小時,用酶標儀測定450 nm吸光度,計算細胞存活率。

?數(shù)據(jù)整理與注意事項
- 每次實驗需設(shè)立3個復(fù)孔,數(shù)據(jù)取均值±標準差。
- 嚴格無菌操作,定期檢測支原體污染。
- 細胞代數(shù)控制在10-15代以內(nèi),避免遺傳漂變。

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